淺談小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞的傳代方法
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞培養(yǎng)條件：*培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide（CO2）,5%
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞傳代方法：
收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
一、如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
二、如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1、棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
2、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。
3、加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6傳代；2~3天1次?！?/div>
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞傳代方法時(shí)需要注意的事項(xiàng)：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。
凍存方法：凍存液：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
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